产品货号:
SY0469
中文名称:
CCK-8试剂盒
英文名称:
Cell Counting Kit(CCK-8)
产品规格:
100T|500T|1000T|3×1000T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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CCK-8试剂盒是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。
组分 | 100T | 500T | 1000T | 3×1000T |
CCK-8试剂盒 | 100T | 500T | 1000T | 3×1000T |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,避光,有效期2年。
- CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较:
检测方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK-8法 甲臜产物的水溶性 差(需加有机溶剂溶解后再检测) 好 好 好 产品性状 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液 使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用 即开即用 检测灵敏度 高 很高 很高 高 检测时间 较长 较短 较短 最短 检测波长 560~600nm 420~480nm 420~480nm 430~490nm 细胞毒性 高,细胞形态完全消失 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变 试剂稳定性 一般 较差 一般 很好 批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合 便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷 - 酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰;
- 细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。
- 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
- 有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
- 白细胞可能需要培养较长时间。
- 当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
- 如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430~490nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
- 培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 制作标准曲线(测定细胞具体数量)
- 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
- 按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3~5个细胞浓度梯度,每个浓度建议
3~6个复孔。 - 接种后培养2~4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)
- 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
- 细胞活性检测
- 在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。
- 向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
- 将培养板在培养箱内孵育1~4小时。
- 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
- 若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
- 在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。
- 细胞增殖-毒性检测
- 在96孔板中配制100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。
- 向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
- 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
- 向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
- 将培养板在培养箱内孵育1~4小时。
- 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
- 若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
- 在96孔板中配制100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。
细胞活力*(%)=[A加药-A空白]/[A0加药-A空白]×100
A加药:具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A空白:具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A0加药:具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
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